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                新聞資訊
                植物L-谷氨酰胺(L-Glutamine)酶聯免疫分析(ELISA)
                添加時間: 2013-5-17 點擊次數: 2248 次 [返回]

                植物L-谷氨酰胺(L-Glutamine)酶聯免疫分析(ELISA

                試劑盒使用說明書

                本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定植物組織,細胞及其它相關樣本中L-谷氨酰胺(L-Glutamine)含量。

                實驗原理:

                   本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物L-谷氨酰胺(L-Glutamine)水平。用純化的L-谷氨酰胺(L-Glutamine)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入L-谷氨酰胺(L-Glutamine),再與HRP標記的L-谷氨酰胺(L-Glutamine)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的L-谷氨酰胺(L-Glutamine)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物L-谷氨酰胺(L-Glutamine)濃度。

                試劑盒組成

                試劑盒組成

                48孔配置

                96孔配置

                保存

                說明書

                1

                1

                封板膜

                2片(48

                2片(96

                密封袋

                1

                1

                酶標包被板

                1×48

                1×96

                2-8保存

                標準品:360ng/L

                0.5ml×1

                0.5ml×1

                2-8保存

                標準品稀釋液

                1.5ml×1

                1.5ml×1

                2-8保存

                酶標試劑

                3 ml×1

                6 ml×1

                2-8保存

                樣品稀釋液

                3 ml×1

                6 ml×1

                2-8保存

                顯色劑A

                3 ml×1

                6 ml×1

                2-8保存

                顯色劑B

                3 ml×1

                6 ml×1

                2-8保存

                終止液

                3ml×1

                6ml×1

                2-8保存

                濃縮洗滌液

                20ml×20倍)×1

                20ml×30倍)×1

                2-8保存

                標本要求:

                1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20保存,但應避免反復凍融

                2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

                操作步驟:

                1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為240 ng/L160 ng/L 80ng/L40ng/L 20ng/L)。

                2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

                3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。

                4.         配液:將3048T20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水3048T20倍)倍稀釋后備用。

                5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

                6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。

                7.         溫育:操作同3

                8.         洗滌:操作同5

                9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37避光顯色15分鐘.

                10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

                11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

                注意事項:

                1.  試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

                2.  濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

                3.  各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

                4.  請每次測定的同時做標準曲線,最好做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

                5.  封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

                6.  底物請避光保存。

                7.  嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

                8.  所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

                9.  本試劑不同批號組分不得混用。

                10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

                文本框:  計算:

                以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,   

                在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD     

                值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋      

                倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標      

                準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD      

                代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋      

                倍數,即為樣品的實際濃度。                  

                 

                                                              

                (此圖僅供參考)

                試劑盒性能:

                1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.92以上。

                2.批內與批見應分別小于9%15%

                檢測范圍:                                             

                10ng/L-300ng/L                                        

                                           

                保存條件及有效期:

                1.試劑盒保存:2-8

                2.有效期:6個月

                 

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